【摘要】　目的　进一步了解骨形成蛋白(BMP)在牙齿及牙周组织中的表达，为研究BMP在牙周组织的修复再生及骨改建中的作用提供实验数据。方法　用BMP单克隆抗体免疫组化染色及计算机图像分析的方法对正常兔牙周组织BMP的表达进行了定性、定量分析。结果　在牙周膜中，BMP的分布不同，在靠近牙槽骨和牙骨质侧染色较深，成骨细胞、成牙骨质细胞、成纤维细胞染色均呈强阳性，牙槽骨、牙龈染色阴性。近中侧BMP表达量明显低于远中侧。结论　正常兔牙周组织中存在BMP，兔上颌第一磨牙生理性牙齿移动的方向可能是向近中侧。
　　【关键词】骨形成蛋白　　牙周组织　　免疫组织化学染色

　　骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)是一种具有高度骨诱导活性的低分子多肽。在人和许多动物的骨组织、牙齿及牙周组织中都有BMP的存在，它主要分布在一些具有成骨倾向的细胞中，并参与骨组织、牙齿组织的形成。本实验应用BMP单克隆抗体对正常兔牙齿及牙周组织进行了免疫组织化学染色，通过光镜观察及计算机图像分析的方法对正常兔牙周组织BMP的表达进行了定性、定量分析，以期进一步探讨BMP在牙齿及牙周组织的分布，为研究BMP在牙周组织的修复再生及骨改建中的作用提供实验依据。

材料和方法

　　1.主要试剂及仪器：抗骨形成蛋白单克隆抗体(西安第四军医大学口腔医学院)，该抗体为小鼠IgG2a，工作浓度为1：50。通用型抗体、DAB发色剂(宝泰克公司)。计算机图像分析仪(加拿大NORTHERN ECLIPSE公司生产、白求恩医科大学预防医学院提供)。
　　2.主要方法：选用体重在1.5kg左右的健康大耳白兔3只，经耳缘静脉注射20毫升空气处死。取含左、右侧上颌第一磨牙及其周围牙槽骨的组织块两块，固定于10%福尔马林溶液中，15íTA脱钙3周、包埋、制成蜡块，进行组织切片。组织切片以平行于牙体长轴为标准作近远中向连续切片，切片厚度为5微米。切片按常规SP法进行免疫组织化学染色。抗骨形成蛋白单克隆抗体工作浓度为1：50，阴性对照组用PBS代替第一抗体。应用图像分析仪，对每张免疫组织化学染色后的切片作BMP定量分析。在组织切片上确定4个测量部位：第一磨牙的近中、远中的牙周膜的近牙骨质侧(以下简称牙周膜区)和近牙槽骨侧。每个部位随机选择3个视野，测量BMP阳性表达的面积。

结　　果

　　1.BMP单克隆抗体免疫组织化学染色结果表明：在正常兔牙齿及牙周组织中存在BMP，不同部位BMP的含量不同。在正常兔牙周组织中，BMP主要分布于牙周膜及其周围组织细胞的胞浆中，但在牙周膜中的分布不均匀，在靠近牙槽骨和牙骨质的区域阳性染色较强，而中间区域阳性染色较弱；成骨细胞、成牙骨质细胞、成纤维细胞染色均呈强阳性，破骨细胞染色呈弱阳性；近中侧牙周膜BMP染色强度小于远中侧。骨髓腔、血管周围的细胞胞浆染色也较深，牙槽骨染色阴性，其骨细胞染色也为阴性。牙龈、牙骨质染色阴性；管周牙本质染色阳性，其余部位均为阴性；根尖上皮鞘BMP染色阴性；牙髓中未分化间充质细胞染色阳性，而成纤维细胞染色阴性(见图1，阴性对照见图2。)
　　2.正常兔牙周组织中不同部位BMP表达量的变化：在正常兔牙周组织中，上颌第一磨牙近、远中侧牙周膜、牙槽骨表面BMP的表达量明显不同，经统计学分析，二者有显著性差异(见附表)。

附表　正常兔牙周组织中不同部位BMP表达量的变化

	近中侧	远中侧	P
牙周膜区	2.20±1.39	5.87±1.80	＜0.05
牙槽骨区	1.34±0.54	3.95±1.33	＜0.05

 注：±s，近中侧与远中侧比较，n=3

讨　　论

　　以往的研究表明，在牙周组织的修复再生中，牙周膜起着重要的作用［1，2］。体外研究表明，牙周膜细胞具有与牙龈成纤维细胞不同的生物学特性，并具有骨母样细胞的生物学表现。
　　骨形成蛋白(BMP)作为骨生长的促进因子广泛存在于人和动物的硬组织，定位于成骨及成软骨细胞、成釉及成牙本质细胞等具有成骨倾向的细胞胞浆中，主要由未分化的间充质细胞分泌，在局部释放，诱导未分化间充质细胞向成骨细胞方向转化，具有诱导成骨的作用［3，4］。

责任编辑：姚红祥